中文名稱

阻抑消減雜交

英文名稱

suppressive subtraction hybridization;SSH

定　　義

將阻抑性聚合酶鏈反應與消減雜交相結合的實驗方法，能有效地擴增低豐度的差異基因表達序列。一般是將目標互補DNA(cDNA)5′端分別加上兩種人工接頭，用過量的驅動DNA進行兩次雜交，得到兩個5′端有不同接頭、不與驅動DNA雜交的目標cDNA，然后用與兩種人工接頭互補的引物PCR擴增得目標細胞差異表達的cDNA序列。

應用學科

生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）

《閘閥彎管液流系統振動噪聲及阻抑》是化學工業出版社出版圖書。

閘閥彎管液流系統振動噪聲及阻抑

• 出版社： 化學工業出版社

• ISBN：9787122386274

• 版次：1

• 商品編碼：12865093

• 品牌：化學工業出版社

• 包裝：平裝

• 開本：16開

• 出版時間：2021-07-01

• 用紙：膠版紙

• 頁數：159

• 正文語種：中文

內容簡介

本書采用理論分析、實驗研究和數值模擬相結合的方法，對閘閥關閉過程中閘閥彎管液流系統的流固耦合行為進行模擬分析，掌握了壁面湍流邊界層引發的壓力脈動、振動及噪聲分布情況，提出了有效抑制帶閥門彎管液流管路系統振動及噪聲的結構優化方案，并采用聚酰亞胺樹脂基礦物質復合材料設計新型高阻尼減振復合支承座，為抑制液流系統振動及噪聲的產生和傳播，解決閘板卡澀、磨損等問題提供指導及解決方案。

本書可作為高等院校、企業中從事充液管路系統減振降噪理論和技術研究的科研人員及相關專業師生的參考用書。 2100433B

SSH 即抑制消減雜交技術是由Diatchenko 等于1996 年以m RNA 差別顯示技術為基礎建立起來的篩選未知差異表達基因的新技術。它主要基于最近出現的抑制PCR , 并結合標準化(normalization 或equalization ) 和消減雜交( substractive hybridization)。抑制PCR 通過利用含引物序列的雙鏈接頭(adaptor) 充當引物模板, 使兩端接上同一接頭的非目的雙鏈片段具有反向末端重復序列, PCR 中不能擴增, 從而達到抑制非目的片段而選擇性擴增目的片段的目的。標準化步驟平衡了目的基因群中cDNA 的豐度, 即低豐度差異表達的基因不會丟失, 而高豐度差異表達的基因又不會被過量分離。消減雜交則扣除了目的基因群( tester) 與驅趕基因群(driver) 間的同源序列。

存在于tester 中而不存在于driver 中, 或在tester 中較在driver 中有高水平表達。

①第一次差減雜交,用過量的drivercDNA分別與tester2adaptor1cDNA和tester2adaptor2cD2NA雜交。分別形成SSH技術原理圖所示的tester單鏈片段a、tester雙鏈片段b、tester2driver同源雙鏈片段c和driver單、雙鏈片段d。根據雜交二級動力學,豐度較高的分子產生同源雜交體(homo2hy2brid)的速度較快,使高豐度與低豐度單鏈片段a濃度大致相等,從而實現tester單鏈片段a的標準化[6],并使連接一種接頭的差異表達基因a初步富集。②第二次差減雜交,將上述分別與drivercDNA雜交后的tester2adaptor1和tester2adaptor2cDNA混合,再加入新制備的變性drivercDNA,因tester2adaptor1和tester2adaptor2cDNA同源,除形成a、b、c、d片段外,又形成了新的連接有兩種接頭的雙鏈雜交片段e,即連接兩種接頭的差異表達序列e,是進行PCR指數擴增的模板。

PCR之前填補分子粘性末端以利于退火。第一輪PCR,加入針對adaptor1和adaptor2外側序列的特異引物進行擴增。結果:a、d片段因沒有引物結合位點,不能進行PCR擴增;b片段由于兩端均為同一接頭,具有反向末端重復序列(invertedre2peats),在單鏈內部形成互補發卡結構的可能性及穩定性均大于引物與其配對結合的可能性及穩定性,故在PCR反應中不能擴增;c片段的一端為一種接頭而另一端無接頭,只能線形擴增;只有e片段末端有兩種不同接頭,可通過PCR作指數擴增。第二次PCR,加入一對與接頭內側序列相同的巢式PCR特異引物,進一步富集差異表達序列并降低背景。經過兩輪PCR,基于PCR抑制效應的存在,以及選用了兩對引物,可以特異擴增代表了差異表達的cDNA片段。

經上述PCR所得的差別表達基因片段可以利用接頭上存在的酶切位點,插入適當載體,轉化細菌。經X-Gal藍白菌落初步篩選,獲得具有差異表達cDNA片段的陽性克隆。然后通過Northern雜交鑒定,cDNA序列分析,可獲得一些新的ESTs序列,如進一步對該ESTs進行深入的結構和功能研究,可望獲得新的具有重要生物學作用的全長功能基因。

抑制消減雜交(suppression subtractive hybridization,SSH) 是建立在抑制PCR 與消運用雜交二級動力學原理，減雜交技術相結合的基礎上的更簡單快速的分離差異基因的方法。即豐度高的單鏈DNA 在退火時產生同源雜交的速度快于豐度低的單鏈DNA，使原來在豐度上有差別的單鏈DNA 相對含量達到基本一致，利用鏈內退火優于鏈間退火的特點，使非目的序列片段兩端反向重復序列在退火時產生類似發卡的互補結構，無法作為模板與引物配對從而選擇性地抑制了非目的基因片段的擴增。

中文名稱

抑制消減雜交

英文名稱

suppression subtractive hybridization;SSH

定　　義

將抑制PCR與消減雜交技術相結合的一種快速分離差異表達基因的方法。

應用學科

遺傳學（一級學科），基因組學（二級學科）