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目的:對垂絲海棠花和葉α-葡萄糖苷酶抑制活性進行研究。方法:利用體外α-葡萄糖苷酶抑制模型,以阿卡波糖為陽性對照對α-葡萄糖苷酶抑制活性評價。結果:垂絲海棠花和葉的不同提取部位均具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性,垂絲海棠葉70%乙醇部位(IC50=69.68 mg·L-1)的α-葡萄糖苷酶的抑制活性最好,遠高于陽性對照阿卡波糖(IC50=1 213.38 mg·L-1)。垂絲海棠葉中70%乙醇部位、石油醚部位和乙酸乙酯部位活性均高于垂絲海棠花中相應部位,而葉中正丁醇部位略低于花的正丁醇部位,且都高于陽性對照阿卡波糖。此外,各部位的抑制活性均與質量濃度呈現相關性,具有一定的濃度依賴性。結論:垂絲海棠花和葉不同提取部位均具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性,但不同提取部位其抑制活性有差別。
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【目的】篩選鑒定1株產β-葡萄糖苷酶的菌株,克隆、表達該菌株中的β-葡萄糖苷酶基因,研究重組酶的酶學性質并進行分子改造。【方法】在自然界中采集土樣,篩選到1株具有β-葡萄糖苷酶活性的菌株,對野生菌進行16S rDNA鑒定,比對分析Gen Bank數據庫中與野生菌同屬的β-葡萄糖苷酶基因序列,設計簡并引物PCR擴增基因保守區;設計引物擴增目的基因,以pQE30為表達載體構建重組質粒,轉化至大腸桿菌中進行誘導表達;采用鎳親和層析對重組酶進行純化,研究其酶學性質;采用易錯PCR和定點隨機突變相結合的方法對野生型β-葡萄糖苷酶進行分子改造。【結果】一個來自于差異檸檬酸桿菌GXW-1的β-葡萄糖苷酶基因被克隆并在大腸桿菌中表達。酶學性質研究結果表明該β-葡萄糖苷酶CBGL的最適溫度為45°C,最適p H為6.0,V_(max)值是(0.1704±0.0073)μmol/(mg·min),K_(cat)值為(0.2380±0.0102)/s。CBGL能水解α-pNPG、甜菊苷、黃豆苷和染料木苷。對野生酶進行分子改造,獲得V_(max)是野生酶2.54倍的突變體W147F。【結論】CBGL不僅具有β-1,4-糖苷鍵水解能力,還可能具有一定的α-糖苷鍵水解酶活性。此外,CBGL還能夠水解天然底物甜菊苷、黃豆苷和染料木苷。這些特性表明該β-葡萄糖苷酶在理論研究及在工業中有一定的應用價值。
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